“中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)第二十一次學(xué)術(shù)會(huì)議暨第五屆中國(guó)病理年會(huì)”期間，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理科應(yīng)建明教授分享了BRAF基因突變檢測(cè)在甲狀腺癌、結(jié)直腸癌等實(shí)體瘤鑒別診斷、治療指導(dǎo)及預(yù)后管理方面的重要意義，以及免疫組化BRAF V600E抗體檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用。

BRAFV600E突變檢測(cè)助力結(jié)直腸癌的鑒別診斷、治療指導(dǎo)和預(yù)后管理

根據(jù)WHO數(shù)據(jù)，結(jié)直腸癌（CRC）位列男性常見(jiàn)惡性腫瘤第三位和女性常見(jiàn)惡性腫瘤第二位，約5%~15%結(jié)直腸癌會(huì)發(fā)生BRAF位點(diǎn)特異性突變，其中超過(guò)90%為BRAF V600E突變。

BRAF V600E突變可排除林奇綜合征（LS），指示為散發(fā)型結(jié)直腸癌（SCRC）。BRAF V600E檢測(cè)有效簡(jiǎn)化了LS診斷流程，采用錯(cuò)配修復(fù)基因（MMR）蛋白免疫組化染色法篩查疑似患者。若MMR蛋白表達(dá)正常，可排除LS；MMR蛋白表達(dá)缺失時(shí)，需具體分析MLH1、MSH2、MSH6及PMS2四種蛋白表達(dá)情況。如MLH1缺失，則進(jìn)行BRAF突變分析，若為V600E陽(yáng)性預(yù)示很可能患有SCRC。歐洲臨床腫瘤學(xué)會(huì)（ESMO）和美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南建議，MLH1基因缺失時(shí)應(yīng)檢測(cè)BRAF V600E以排除SCRC。

BRAF V600E還可幫助臨床醫(yī)生進(jìn)行CRC預(yù)后管理和指導(dǎo)治療。BRAF V600E突變導(dǎo)致CRC患者預(yù)后不良概率提升，尤其晚期患者V600E突變陽(yáng)性預(yù)示預(yù)后非常差。盡管尚存在爭(zhēng)議，目前有限資料提示，V600E突變患者抗EGFR單抗治療應(yīng)答率明顯低于BRAF野生型患者。

BRAF V600E檢測(cè)有效輔助甲狀腺癌診療及預(yù)后

對(duì)于甲狀腺癌，BRAF V600E突變發(fā)生在40%~70%甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中，而在甲狀腺濾泡狀腺癌（FTC）、甲狀腺髓樣癌（MTC）和良性甲狀腺增生等中極少發(fā)現(xiàn)，BRAF V600E可作為PTC臨床鑒別診斷指標(biāo)。因BRAF V600E與PTC惡性特征具有相關(guān)性，與腫瘤大小等高風(fēng)險(xiǎn)特征呈正相關(guān)，可輔助PTC診斷。采用甲狀腺細(xì)針穿刺活檢（FNAB）與BRAF V600E聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行PTC診斷，敏感性可提升至80%。美國(guó)甲狀腺協(xié)會(huì)（ATA）管理指南建議，甲狀腺結(jié)節(jié)患者在細(xì)胞學(xué)活檢不確定時(shí)，建議使用分子標(biāo)志物（如BRAF、RAS、RET/PTC等）輔助診斷。

BRAF V600E突變與PTC侵襲性及不良預(yù)后有關(guān)，可為PTC治療提供參考。術(shù)前檢查PTC的BRAF V600E基因突變可輔助預(yù)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)、指導(dǎo)手術(shù)切除范圍及術(shù)后后繼治療。NCCN2014年第2版甲狀腺癌指南指出，腫瘤的組織學(xué)類(lèi)型、腫瘤大小、局部浸潤(rùn)及壞死、血管浸潤(rùn)以及BRAF基因突變狀態(tài)和轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的重要變量。

免疫組化BRAF V600E（VE1）抗體檢測(cè)優(yōu)化多項(xiàng)腫瘤診斷

近幾年來(lái)，免疫組化技術(shù)（IHC）用特異性抗體VE1識(shí)別V600E突變蛋白進(jìn)行檢測(cè)，正逐漸成為當(dāng)前BRAF基因突變常用檢測(cè)方法。第一屆中美腫瘤診斷病理高峰論壇期間，美國(guó)蓋辛格健康系統(tǒng)機(jī)構(gòu)（Geisinger Health System）免疫組化實(shí)驗(yàn)室主任陳宗明博士分享了一項(xiàng)對(duì)比IHC染色與分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究。陳宗明博士表示：“進(jìn)行BRAF V600E IHC檢測(cè)的關(guān)鍵在于確保檢測(cè)質(zhì)量。以CRC診斷為例，BRAF特異性突變IHC檢測(cè)可通過(guò)IHC結(jié)果指導(dǎo)測(cè)序，具有更優(yōu)的成本效益比。建議將BRAF V600E IHC檢測(cè)應(yīng)用于LS、PTC等篩查，并定期評(píng)估其與分子生物學(xué)檢測(cè)間的一致性，做好質(zhì)評(píng)與質(zhì)控?！?/p>

2015年3月，《Nature》雜志《Scientific Reports》子刊發(fā)表了中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院應(yīng)建明教授團(tuán)隊(duì)的研究，文章深入研究了Sanger測(cè)序、RT-PCR及IHC三種方法學(xué)在檢測(cè)實(shí)體瘤BRAF V600E突變中的一致性，使用羅氏診斷BRAF V600E（VE1）抗體，在VentanaBenchMark全自動(dòng)染色平臺(tái)進(jìn)行IHC檢測(cè)。779例患者中，150例VE1染色陽(yáng)性。對(duì)349例患者進(jìn)行Sanger測(cè)序及RT-PCR（cobas? 4800）檢測(cè)（包括150例VE1陽(yáng)性病例）顯示，IHC方法學(xué)靈敏度和特異性分別為100%和99%，可作為BRAF突變檢測(cè)很好的初篩工具，并指導(dǎo)預(yù)后和治療方案。

作為率先用于體外診斷BRAF突變的即用型抗體，羅氏診斷BRAF V600E（VE1）抗體聯(lián)合OptiViewDAB IHC檢測(cè)試劑盒，對(duì)檢測(cè)多種腫瘤中單細(xì)胞水平BRAF V600E突變具有良好的敏感度和特異性。與現(xiàn)有分子檢測(cè)相比，BRAF V600E（VE1）抗體一種檢測(cè)即可適用于結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、毛細(xì)胞白血病與其他多種癌癥中的BRAF V600E突變蛋白診斷，為解剖病理實(shí)驗(yàn)室提供快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。